单核细胞和巨噬细胞培养用细胞因子
单核细胞是单核吞噬细胞系统(Mononuclear phagocyte system, MPS)的成员，MPS是对所有高吞噬性单核细胞及其前体的综合分类。MPS包括除多形核粒细胞以外的所有髓系免疫细胞。在多色荧光活化细胞分选技术(FACS)出现之前，对MPS中细胞的来源和谱系知之甚少，FACS能够根据特定细胞标志物的表达来识别祖细胞和分化细胞群。目前的单核细胞分化模型表明，循环单核细胞来源于具有髓系限制潜能的造血干细胞(HSC)源性祖细胞。骨髓单核细胞分化期间被普遍认同的步骤包括髓系共同祖细胞(CMP)、粒细胞-巨噬细胞前体(GMP)、巨噬细胞和DC前体(MDP)。
小鼠单核细胞的发育谱系。名词缩写表：CD103 IpDC，CD103+固有层树突状细胞；CDP，树突状细胞共同前体；CMoP，单核细胞共同祖细胞；CX3CR1+，CX3C-趋化因子受体1；HSC，造血干细胞；MDP，巨噬细胞和树突状细胞前体；MDSC，髓源抑制性细胞；MP，髓系前体；TipDC，生成树突状细胞的肿瘤坏死因子(TNF)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)；pDC，浆细胞样树突状细胞；cDC，典型树突状细胞。
单核细胞是在体内稳态和病原体反应中起关键作用的白细胞。单核细胞在体内循环，并被趋化因子募集到某些部位。在免疫细胞培养中，需要各种细胞因子来维持单核细胞，激活其分化，并扩增为巨噬细胞及其亚型。在培养中应用重组细胞因子可以驱使巨噬细胞具有不同的表型。例如，IFN-γ 结合脂多糖(LPS)诱导单核细胞/巨噬细胞极化成M1表型，这涉及促炎反应和病原体清除。或者，单核细胞可以根据它们所接触的细胞因子被驱动成几种 M2表型中的一种。M2 巨噬细胞包括几种亚型，具有与细胞因子表达、趋化因子分泌和免疫功能相关的独特特征。这些 M2 巨噬细胞亚群有助于预防感染、组织修复、血管生成和免疫调节等过程。用于 T 细胞培养和分化的细胞因子
细胞因子为T细胞在体外的活化、增殖、分化和存活提供了许多必要的信号。人类重组细胞因子可用于重复诱导细胞增殖和分化，以支持CAR-T细胞疗法的开发。T 细胞可大致分为CD4+或CD8+T细胞(也称为细胞毒性T细胞)，每种细胞都有几种亚型。这些T细胞的活化和分化由下列细胞因子驱动。用于维持 naïve T 细胞免疫培养的重组细胞因子
白细胞介素(如IL-2、IL-7 和IL-15)可为T细胞在培养物中的扩增提供必要的信号，从而促进T细胞的增殖。用于CD4+T细胞亚群激活和分化的重组细胞因子
辅助性 T 细胞的极化和功能受其微环境中细胞因子的影响。Th1细胞是参与细胞免疫的CD4+细胞；白细胞介素-12(IL-12)和γ干扰素(IFN-γ)是Th1细胞极化的关键驱动因子。Th2细胞参与体液免疫，其极化由白细胞介素-4(IL-4)驱动。转化生长因子-β(TGF-β)具有免疫抑制特性，有助于将CD4+T细胞群推向Th17、Treg 和Tfh表型。以下所示的其他细胞因子有助于这些亚群的极化、维持和扩增。
效应CD8+T细胞对感染细胞和肿瘤细胞具有很强的细胞毒性。Naive CD8+可以分化为多种作用不同的效应细胞[1]。效应表型的特征是细胞毒性强并可生成细胞因子。靶细胞的杀伤是由CTLs完成的，CTLs属于Tc1细胞。其他由不同细胞因子环境产生的CD8+T-αβ细胞亚群包括Tc2、Tc9、Tc17和CD8+调节性T细胞[2].像各种辅助性T细胞亚群一样，这些细胞表达特异转录因子，并生成特征性的细胞因子和效应分子。例如，细胞毒性Tc1细胞在IL-2和IL-12存在的情况下生成，并能够分泌细胞因子(如IFNγ)。此外，细胞毒性Tc1细胞还会生成参与细胞溶解的分子(如颗粒酶B和穿孔素)。Tc1细胞涉及的转录因子包括T-bet、blimp-1和IRF-4。与此相反，Tc2细胞在IL-4存在的情况下被诱导并能分泌IL-5和IL-13。Tc2细胞是由谱系特异性转录因子GATA3调控产生的。与Tc1细胞不同，Tc2细胞仅表现出低水平的细胞毒性，并且经证明可导致过敏和加剧自身免疫。衰老的CD8+CD28-T细胞表现出失能或调节性衰竭，其增殖能力降低，细胞毒性低，分泌IL-10和具有抑制潜力。在头、颈和肺癌研究中已鉴定出CD8+Tregs群体。同样，衰竭CD8+T细胞表达PD-1、CTLA-4、TIM3、LAG3等受体；它们执行免疫抑制功能并介导免疫逃避。
用于CD8+记忆T细胞产生和维持的重组细胞因子
记忆CD8+T细胞在初次感染后发育，不同的亚群驻留在全身的不同位置。T-αβ细胞亚群可根据其效应记忆分化状态进一步分型[2,3]。这些记忆性CD8+T细胞的特征如下：具有自我更新能力、存在于淋巴组织和非淋巴组织中、以及在随后遇到相同抗原时发挥记忆效应功能。记忆性CD8+T细胞根据效应功能、增殖能力和组织归巢特性方面的差异分为不同亚群：● 中枢记忆性细胞(Tcm)：这些细胞主要位于淋巴组织，并表达淋巴归巢分子CD62L和CCR7。● 效应记忆性细胞(Tem)：这些细胞是抵御感染的第一道防线。它们介导即时效应功能，存在于循环和非淋巴组织中，并表达低水平的淋巴归巢分子CD62L和CCR7。● 组织驻留记忆性细胞(Trm)：这些细胞位于粘膜层。CD8+T细胞的保护性反应通过这些效应和记忆亚群的共同作用实现。小鼠CD8+T细胞的标志物包括CD3、CD5、CD8、CD27和CD28；人CD8+T细胞标志物包括CD2、CD3、CD5、CD8、CD25++、CD27和CD28。
细胞因子套装与类器官研究
类器官（Organoids）技术是生物医学领域的一项重大突破，通过体外培养技术，从干细胞或诱导多能干细胞（iPSCs）生成三维微型组织结构。这些类器官能够模拟人体器官的复杂功能和结构，为疾病研究、药物测试和再生医学提供了新的平台。在类器官的生成和维持过程中，细胞因子起到了至关重要的作用。细胞因子是细胞分泌的小分子蛋白，能够调节细胞的生长、分化和功能。它们通过与细胞表面的受体结合，激活内部的信号传导通路，从而影响细胞的行为。在类器官培养中，细胞因子通过模拟体内的微环境，提供必要的信号以促使干细胞自组织形成复杂的三维结构。生成类器官的过程中，不同的细胞因子被用来激活或抑制特定的信号通路。例如，在生成小肠类器官时，需要使用EGF、FGF-10、R-Spondin-1、Noggin和Wnt-3A等细胞因子。这些因子共同作用，促进肠道干细胞的增殖和分化，最终形成具有功能性肠道结构的类器官。不同的细胞因子在类器官生成中扮演不同的角色。例如，Wnt-3A和R-Spondin-1通过激活Wnt信号通路，促进干细胞的自我更新和增殖。Noggin通过抑制骨形态发生蛋白（BMP）信号通路，防止干细胞过早分化。表皮生长因子（EGF）和成纤维细胞生长因子（FGF）则通过激活相应的生长信号通路，促进细胞的增殖和分化。在2016年的一项研究中，研究人员使用迷你旋转生物反应器从人iPSCs生成了前脑特异性类器官。这些类器官通过一系列的培养步骤，包括使用特定的培养基和基质，逐渐形成了与人体前脑类似的结构。在该研究中，研究人员通过Wnt-3A等因子共同作用，确保了类器官的成功生成和功能成熟。为了更好的助力实验和研究，PeproTech推出了类器官细胞因子组合套装。
细胞因子的使用不仅能够提高类器官生成的效率和成功率，还能改善类器官的功能成熟度和组织复杂性。随着对细胞因子作用机制的深入研究，类器官技术有望在再生医学、疾病模型和药物筛选中发挥更大的潜力。
除了单核细胞和巨噬细胞培养, T 细胞培养和分化,类器官的应用外，依托超过35年的专业经验，Gibco PeproTech提供种类丰富的高品质细胞因子产品，包括：应用于免疫学、细胞疗法、神经生物学、类器官、蛋白质研究、干细胞研究等领域的RUO 科研级别（Research Use Only）细胞因子，细胞治疗、蛋白通路研究细胞培养肉等领域的无动物成分级别（Animal-Free）细胞因子，及应用于同种异体与自体疗法、HSC 疗法开发与生产、干细胞疗法、糖尿病等领域的GMP 级别（PeproGMP）细胞因子。无论您是处于科学研究、工艺开发还是商业化生产阶段，我们都可以通过不同级别的PeproTech细胞因子为您助力。蛋白酶及抑制物
什么是蛋白酶？
蛋白酶(亦称为蛋白水解酶或肽酶) 是指能水解蛋白或多肽中肽键的酶。大多数蛋白酶的作用方式特异，水解通常发生在底物蛋白或多肽的特定氨基酸残基、序列或其附近的肽键处。蛋白酶在许多疾病和生物学过程中均发挥着重要的作用，如胎儿和生后发育、繁殖、信号转导、免疫应答、多种自身免疫和退行性疾病，以及癌症等。蛋白酶也是重要的研究工具， 常用于蛋白的分析和制备。
蛋白分析和制备蛋白酶
1,Aminopeptidase(Aeromonas)作用：顺序裂解氨基末端的氨基酸，E、D、X-P除外 |
| 2,Carboxypeptidase-B (Rat) |
| 别名：Endoproteinase Lys/Arg-Arg |
| 底物：在谷氨酸(Glu,E)的羧基端进行剪切；特定条件下也可剪切天冬氨酸(Asp,D) |
基质金属蛋白酶和组织型抑制物
基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs）属蛋白内切酶，其催化活性的发挥需要锌和钙。这类酶在细胞外基质（ECM）的维持和重塑中发挥重要作用。MMPs表达的上调或其抑制物表达的下调所导致的MMPs活性的升高，与多种退行性疾病，如关节炎、心血管疾病、 骨髓生长板疾病和癌症转移等有关。TIMPs(Tissue inhibitor of metalloproteinases,TlMPs) ，即组织型基质金属蛋白酶抑制物， 是MMPs的天然抑制物，其与活化的MMPs结合后抑制MMPs活性，从而保护细胞外基质不被MMPs降解和重塑。1.Human MMP-1 的作用：
降解I,II,III,VII,X型胶原
2.Human MMP-2的作用：
3.Human MMP-3的作用：
降解纤连蛋自，层粘连蛋白， III、IV、 V型胶原和软骨蛋白聚糖
4.Human TIMP-1的作用：
5.Human TIMP-2的作用：
Serpins (丝氨酸蛋白酶抑制物)
Serpins(serine protease inhibitors）是诸多丝氨酸蛋白酶的抑制物,其通过引起靶蛋白酶的构象改变而破坏蛋白酶的活性位点，从而不可逆地抑制靶蛋白酶的活性。Serpins在控制凝血、炎症和肿瘤发生等一系列生物学过程中发挥重要作用，因而常成为医学研究的关注点。部分 Serpins虽然具备Serpins的蛋白结构，但不是酶抑制剂， 这些Serpins称为非抑制性Serpins，具有储存、转运和分子伴侣等多种功能。1,Human Maspin 别名：SerpinB5, Protease inhibitor 5 |
2,Human Neurosperin 别名：Serpin11, Protease inhibitor 12 |
3,Human PAI-1 别名：Plasminogen Activator lnhibitor-1，Serpin E1作用：组织型(tPA)和尿激酶型(uPA)纤溶酶原激活物的主要抑制物 |
4,Human PAI-2 别名：Plasminogen Activator lnhibitor-2, Monocyte Argserpin, Serpin B2, Urokinase Inhibitor作用：尿激酶型（uPA）纤溶酶原激活物的主要抑制物 |
Human PEDF 别名：Pigment epithelium-derived factor, SerpinF1, EPC-1 |
Human Vaspin 别名：Visceral adipose tissue-derived serpin |
PeproTech的蛋白酶类产品均为高纯度的重组蛋白，不含任何杂质蛋白，避免了实验结果的不确定性和分析的复杂性。这些产品的活性和特异性均经过充分的验证，且大多数是在无动物成分的条件下生产出来的。重组细胞因子和蛋白溶解稀释方法
PeproTech公司的所有重组细胞因子和蛋白均经过冻干处理，均为冻干粉。在使用前需要完全溶解，然后以液体形式加到培养体系或注入动物体内。为了保证蛋白发挥最佳生物活性，在溶解的时候需要遵循以下注意事项。首先根据收到的产品上的标签信息查询对应的说明书
（1） 确定合适的溶解液
收到产品后，首先应查看说明书中细胞因子储存和处理的方法。
（2）确定合适的温度
图中的表格给出了细胞因子在冻干粉(Lyophilized)状态下的溶解(Reconstituted)和稀释(Extended Storage)的储存温度以及时间，您可以根据自己的实际需要选择。
2、溶解
试剂开盖前一定要离心，以确保细胞因子和蛋白集中于管底。离心方法：10000-12000rpm离心30-60s或者3000-3500rpm离心5min。注：小规格的细胞因子或蛋白离心后如果看不到沉淀，也属正常现象，请放心使用。根据说明书紫色标识地方的描述，选择合适的溶解液，溶解到后边的浓度范围内。如此可以确保蛋白充分溶解复性，保证产品质量。请不要使用非建议溶液溶解。
目的：使细胞因子从无活性的冻干粉状态充分溶解复性成为有活性的蛋白溶液。
注意：不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋，可以用枪头轻轻吹打几次助溶。有的细胞因子溶解比较慢，需要在室温静置或者摇床低速摇一段时间使其充分溶解。
（3）短期储存
溶解后的蛋白溶液最多可在2-8℃储存1周。
（4）长期储存
如果您的实验，一周内不能用完溶解后的蛋白溶液。那么必须将第2步中获得的溶液用含载体蛋白的溶液进一步稀释。(详见：三、稀释)
目的：对溶解的蛋白溶液进行稀释冻存。加入载体蛋白可以封闭掉管壁上的蛋白结合位点，且可以在低温下维持细胞因子的稳定。
3、稀释
（1） 配制
配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀释液备用（确保无菌），这三种稀释液的配制Buffer可以用PBS或者细胞基础培养基。使用以上三种稀释液中的任意一种稀释重悬的蛋白溶液，稀释浓度根据您的使用浓度确定，不要低于10ug/ml。然后即可分装成小管（每管分装体积≥10ul），冻存在-20℃至-80℃。避免反复冻融。
（2）使用方法
使用时取用一支冻存的细胞因子，加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。
使用方法纵览：
4、常见问题解答
1.为什么会有这么多种溶解/重悬方法?
答:蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子在出厂前均经严格测试，说明书上所标明的溶解液是能够将该细胞因子完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。
2.如果没有注意CoA的描述，直接使用含载体蛋白的溶液容解/重悬细胞因子，这样做可以吗?
答:不可。载体蛋白对重组蛋白的活性不会产生影响，但会影响重组蛋白的溶解度，可能导致重组蛋白的浓度低于级期值。因此，还是应该拔照说明书的建议先用会通演警
3.使用推荐的试剂将细胞因子重悬后，直接分装冻存于-20°C至-80°C，这样可以吗?
答:不可。
（1)塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用，也就是说溶液中的蛋白很容粘附在管壁上。一旦粘附，蛋白很难与管壁分离。载体蛋白的作用是预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点，使细胞因子不会黏附于管壁。如果直接分装冻存，细胞因子会粘附到管壁上，导致溶液中实际溶解的细胞因子浓度大为降低，最终表现为细胞因子活性下降
（2)载体蛋白可以起保护作用，防止重组蛋白在低温环境中冻坏。
4.高于或低于推荐浓度范围会有什么影响呢?
答:（1)高于推荐的浓度范围，可能会超过重组蛋白的最大溶解浓度，使重组蛋白无法完全溶解。
（2)低于推荐浓度范围，重组蛋白可能不稳定，导致蛋白活性的减弱。为了保证重组蛋白的溶解度与生物活性，需将重组蛋白重悬至推荐浓度范围。
5、溶解稀释液套装
细胞因子溶解稀释套装外观为无色澄清透明的液体，无明显异物，无菌。适用于细胞因子的溶解和稀释，使用方便，操作简单，可高效溶解并稳定保存相应的细胞因子。
